Indholdsfortegnelse
Formål 3
Teori 3
Hypotese 6
Materialer 6
Fremgangsmåde 7
Resultater 8
Diskussion 9
Konklusion 10
Optimer dit sprog - Læs vores guide og scor topkarakter
Uddrag
Formål
Formålet ved det er forsøg er at udføre en transformation, hvor vi transformerer E. coli bakterier med et gen, som koder for Grønt Fluorescerende Protein i et kvalitativt kontrolleret laboratorieforsøg ved hjælp af den deduktive forskningsstrategi.
Genet stammer oprindeligt fra den bioluminiscerende gople Aequorea victoria. Ved hjælp af plasmiders evne til at udveksle gener mellem bakterier, vil vi se om vi kan få E. coli bakterierne til at fluorescere og lyse i mørket og får en skinnende grøn farve under ultraviolet lys.
Desuden vil vi se, om vi kan få bakterierne til at blive resistente over for ampicilin ved hjælp af genet, som koder for Beta Lactamase, og yderligere om vi kan bruge en promotor, Regulatorisk gen, til at kontrollere produktionen af Grønt Fluorescerende Protein ved hjælp af en biologisk faktor som arabinose i proteinsyntesen.
Teori
pGLO er en metode, som man bruger i bioteknologi, hvor man bruger plasmider til at kreere modificeret organismer.
Plasmidet indeholder flere ønsket gener såsom Grøn Flouriserende Protein (GFP), Beta Lactamase (bla), Regulatorisk gen (araC) og Genet for replikation (ori).
Grønt Fluorescerende Protein skulle få bakterierne til at fluorescere i mørke. Beta Lactamase, er et gen, som gerne skulle gøre bakterierne resistente overfor ampicilin.
Det Regulatroiske gen, som er en promotor, kan man regulere produktionen af Grønt Fluorescerende Protein med biologisk faktor som arabinose i proteinsyntesen.
Hvis arabinose ikke er tilstede dækker det Regulatoriske gen over startscondonet for genet der koder for Grønt Fluorescerende Protein, så det ikke kan aflæses i transskriptionsprocessen af enzymet, RNA-polymerase.
Hvis der så er arabinose, binder det sig til det Regulatoriske gen, så den ændrer sin facon, så genet for Grønt Fluorescerende Protein kan aflæses i transskriptionsprocessen.
Genet for replikation gør replikation i en bestemt sekvens i genomet mulig. Man laver så en transformation af bakterier, så de kan få de ønskede gener fra pGLO-plasmidet.
Det starter med, at man genmodificerer plasmider, med et gen fra en donororganisme goplen, Aequorea victoria, som har genet for Grønt Fluorescerende Protein.
Så isolerer man DNA’et fra Aequorea victoria, og med et restriktionsenzym klippes det ønskede gen til. Derefter tilføjer man det samme restriktionsenzym til plasmider, som klipper plasmiderne op.
Restriktionsenzymet klippet skævt, så man får to frie, symmetriske ender, såkaldte sticky ends. Derefter samles det ønskede gen med DNA’et i plasmiderne med hjælp fra enzymet, DNA-polymerase, som sætter de såkaldte sticky ends sammen.
Derefter begynder selve transformationen af bakterierne. Transformation foregår ved at DNA-materialet overføres til bakterier. Først skal bakterierne ligge i en særlig saltopløsning for, at cellemembranen skal blive lettere gennemtrængelige.
Så blandes plasmiderne med bakterierne, som så udsættes for et varmechok. Denne proces vil få nogle af bakterierne til at optage DNA’et.
Skriv et svar