ELISA test | Biologi Rapport

Formålet med ELISA testen er at lære, hvordan antistoffer kan bruges til at teste om personer er inficeret med sygdomme. I ELISA testen stimuleres smitte med HIV-virus.

Materialer

1     mikrotiter plade med 4 rækker med
hver 3 huller
  De fire rækker mærkes ovenfra:   , +, P1 og P2
1     eppendorf rør mærket AG(for HIV-
antigen)
650 μl “HIV” antigener
1     eppendorf rør mærket +K 200 μl Positiv kontrol (“HIV” antistof)
1     eppendorf rør mærket -K 200 μl Negativ kontrol
    1 eppendorf rør mærket P1 200 μl Patientserum 1
    1 eppendorf rør mærket P2 200 μl Patientserum 2
    1 eppendorf rør mærket 20AB 650 μl Sekundært antistof med peroxidase (enzym)
    7 8  små transfer-pipetter   Mærkes hhv. -K, +K, p1, p2, Ag, 2oAB, Sub og Wash
    1 større 1ml reagenspipette med pumpe 1 ml  
    1 50 ml kolbe med Wash buffer 16 ml Buffer til at skylle med
     
     Bægerglas til affald(evt.kan affald hældes
direkte i vaskene
    Til “skylle-affald”
    1 eppendorf rør mærket Sub 650 μl Peroxidase-substrat (udleveres af læreren lige før sidste inkubation)
       varmeskab   Justeres til en temperatur på 370

 

Fremgangsmåde

1.  Mærk mikrotiterpladen som vist ovenfor.
2. Mærk de 8 transferpipetter som vist i skemaet ovenfor. De skal bruges til at tilføre og fjerne væske fra brøndene.
3. Brug Ag-pipetten og tilsæt 3 dråber antigen (Ag) til alle 12 brønde. Denne proces coater brøndene.
4. Inkubér pladen i 5 minutter ved stuetemperatur.
5. Brug Ag-pipetten og fjern al væske fra brøndene. Pipetten tømmes i bægerglas mrk. “Affald”.
6. Brug wash-pipetten og “vask” hver brønd ved at tilføre brøndene wash-buffer indtil hver brønd er næsten fuld. Undgå at det løber over mellem brøndene.
7. Brug passende mærket pipette for hver række og tøm brøndene for buffer (som skal i (Affald”)
8. Gentag trin 6 og 7 for at vaske brøndene igen.
9. Brug transferpipetten og tilføj 3 dråber negativ kontrol (-K) til øverste rækkes 3 brønde.
10. Ligesom trin 9: Tilføj 3 dråber +K til korrekt mærket række med korrekt mærket pipette. Gør det samme med P1 og P2 – husk korrekt mærket pipette !
11. Inkubér pladen i 5 minutter ved stuetemperatur.
12. Brug korrekt mærket transferpipette for hver række og tøm brøndene. Herved fjernes evt. primært antistof.
13. Vask hver brønd 2 gange med ren buffer. Efter hver vask skal du huske at bruge korrekt mærket pipette til at fjerne væske fra hver række.
14. Brug 2oAB-pipetten og tilsæt alle brønde 3 dråber 2oAB (sekundært antistof).
15. Inkubér pladen i 5 minutter ved stuetemperatur.
16. Brug korrekt mærket transferpipette for hver række og tøm brøndene.
17. Vask hver brønd 2 gange med ren buffer. Efter hver vask skal du huske at bruge korrekt mærket pipette til at fjerne væske fra hver række.
18. Brug pipette mærket “Sub” og tilsæt 3 dråber substrat til hver brønd.
19. Inkubér pladen i 5 minutter ved stuetemperatur.
20. Studér straks eller indenfor få minutter mikrotiterpladens brønde for farveændringer. Notér resultat.

Indholdsfortegnelse
Materialer:
Fremgangsmåde.
a) Buffer. Hvorfor skal pH være 7,1 - 7,5?
b) Hvad sker der, når pladerne coates? Hvad er det, der coates med? Forklar grundigt!
c) Hvad sker der under vaskningen? Hvorfor er "vaskning" nødvendig?
d) Hvad sker der under tilsætningen af patientserum (P1 og P2)? Definér serum.
e) Hvad sker der under tilsætningen af sekundært antistof (2oAB)? Hvor får man sekundært antistof fra? Sekundært antistof er konjugeret med et enzym. Hvorfor?
f) Hvor skal testen ændres, hvis den skulle anvendes for at konstatere om patienter er positive for influenza?
g) Hvorfor er der positiv og negativ kontrol?
Konklusion.
Sematisk oversigt over fremgangsmådens trin 1-8:

Sådan får du adgang til hele dokumentet

Byt til nyt Upload en af dine opgaver og få adgang til denne opgave

  • Opgaven kvalitetstjekkes
  • Vent op til 1 time
  • 1 Download
  • Minimum 10 eller 12-tal

Premium 39 DKK pr måned

  • Adgang nu og her
  • 20 Downloads
  • Ingen binding
  • Let at opsige
  • Adgang til rabatter
  • Læs fordelene her
Få adgang her