Indholdsfortegnelse
Formål
Teori
- Gensplejsning:
- Kromatografisk metode
- Hydrofob interaktions kromatografi

Hypotese
Fremgangsmåde
Resultater og resultatbehandling
- Transformationsforsøg
Diskussion
Konklusion
Bilag

Optimer dit sprog - Læs vores guide og scor topkarakter

Uddrag
Formål
Formålet med forsøgene er at udføre en transformation af plasmidet pGLO over i en E.coli bakterie.

Via dyrkning af bakterien på forskellige selektive medier kan vi selektere/udvælge de bakterier som har optaget pGLO plasmidet.

Anden del går ud på at få de rekombinante bakterier (dem som har optaget plasmidet) til at producere proteinet og herefter oprense det – dvs. få det ud af bakterien – via metoden hydrofob interaktions kromatografi

Teori
Gensplejsning:

Når donor-DNA’et klippes med restriktionsenzymer. Der klippes med to forskellige restriktionsenzymer som har hver deres genkendelsessted altså en bestemt baserækkefølge.

De samme to restriktionsenzymer klipper i vektoren som er plasmidet. Restriktionsenzymerne kan enten klippe blunt ends eller sticky ends hvor de henholdsvis klipper lodret gennem baserne og skævt så man i hver ende får et stykke enkeltstrenget DNA.

De fleste restriktionsenzymer klipper sticky ends så det går vi ud fra i det følgende. Da de to enzymer har forskellige genkendelsessteder kan plasmidet ikke lukke sig om sig selv ved baseparringer hvormed donor-dna’et så ikke vil kunne bindes til plasmidet.

Men dette er også grunden til at det klippede gen og plasmidet passer sammen via baseparingsreglen da de hver har en ende som er klippet med det ene enzym og en ende med det andet enzym.

Hermed kan plasmidet og genet binde sig til hinanden. Næste step er at sætte plasmidet ind i en bakterie vært ved transformation.

Det pGLO plasmid som bruges i forsøget koder for forskellige egenskaber. Plasmidet indeholder et gen som koder for resistens mod ampicillin.

Dette er behjælpeligt når man skal finde ud af om plasmidet er indsat i bakterien succesfuldt.

Hvis den genspejsede bakterie spredes på en agarplade med ampicillin vil den ikke kunne gro på pladen hvis ikke plasmidet er indsat i bakterien mens man vil se vækst på pladen hvis bakterien har dette gen for resistens.

Plasmidet indeholder også et gen som kaldes AraC. AraC blokerer for transskription af GFP indtil araC kommer i forbindelse med arabinose.